产品货号：
BTN14-24860
中文名称：
诺如病毒GI型和GII型通用qRT-PCR试剂盒(染料法)
英文名称：
Norwalk Viruses GI/GII Universal SYBR qRT-PCR Kit
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本公司基于q PCR原理开发了本产品。
诺如病毒，又称诺瓦克病毒Norwalk Viruses N V)是人类杯状病毒科(Human Calicivirus HuCV)中诺如病毒(Norovirus NV)属的一种病毒。诺如病毒分5个基因组GI GV)，其中只有G、G和G可以感染人，而G、GV分别感染牛和鼠。它们是一组形态相似、抗原性略有不同的病毒颗粒。诺如病毒感染性腹泻在全世界范围内均有流行。在中国5岁以下腹泻儿童中，诺如病毒检出率为15%左右血清抗体水平调查表明中国人群中诺如病毒的感染亦十分普遍。我国目前最常见的诺如病毒为G、G型。
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释阳性对照(以102～107这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行)。
二、样品RNA的制备
三、设置RT-PCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
四、数据处理
相关搜索：诺如病毒GI型和GII型通用qRT-PCR试剂盒(染料法)，诺如病毒GI型和GII型通用染料法qRT-PCR试剂盒，Norwalk Viruses GI/GII Universal SYBR qRT-PCR Kit
诺如病毒，又称诺瓦克病毒Norwalk Viruses N V)是人类杯状病毒科(Human Calicivirus HuCV)中诺如病毒(Norovirus NV)属的一种病毒。诺如病毒分5个基因组GI GV)，其中只有G、G和G可以感染人，而G、GV分别感染牛和鼠。它们是一组形态相似、抗原性略有不同的病毒颗粒。诺如病毒感染性腹泻在全世界范围内均有流行。在中国5岁以下腹泻儿童中，诺如病毒检出率为15%左右血清抗体水平调查表明中国人群中诺如病毒的感染亦十分普遍。我国目前最常见的诺如病毒为G、G型。
- 一站式，用于不需要单独准备每种成分包括引物和对照。
- 根据诺如病毒GI型和GII型的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。能同时扩增诺如病毒的GI和GII型。
- 基于染料法qRT PCR检测，灵敏度比常规RT PCR高10 1 00倍，可以达到至少1000拷贝反应。
- 使用一管式q R T PCR技术RT和PCR两步在一个试管内完成不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
- 本产品足够50次2 0μL体系的RT PCR只能用于科研不能用于临床。
| 组分 | 规格 |
| 2×qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
| 10×qRT-PCR酶混合液 | 100μL |
| ROX染料I，50× | 20μL |
| ROX染料II，50× | 20μL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 诺如病毒GI型和GII型通用染料法qRT-PCR引物混合液 | 100μL |
| 诺如病毒GI型和GII型通用染料法qRT-PCR阳性对照(1×108拷贝/μL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释阳性对照(以102～107这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行)。
- 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同)。
- 在7号管中加入5μL 1×108拷贝/μL的阳性对照(本试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×107拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头，在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品RNA的制备
- 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的阳性对照梯度稀释液中的第4号(浓度为1×104拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作为制备的阴性对照。
- 用自选方法纯化N+2个样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送20次免RNA提取的核酸释放剂试用装，其使用手册可以从本公司网站www.bjbalb.com，通过搜索产品名称核酸释放剂或产品货号BTN61202下载。
三、设置RT-PCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，1个用于PCR阳性对照(用第4号管的阳性对照稀释液做模板)。下面只以定量分析为例描述操作步骤。
- 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，阳性对照样品要等所有管子盖上盖子后最后加)：
注：成分 样品管
N+2个RT-PCR
阴性对照RT-PCR阳性对照
(2～7管)2×qRT-PCR缓冲液 10μL 10μL 各10μL 诺如病毒GI型和GII型通用染料法qRT-PCR引物混合液 2μL 2μL 各2μL 50×ROX(见注) 0.4μL 0.4μL 各0.4μL N+2个RNA模板 5.6μL 不加 不加 超纯水 不加 5.6μL 不加 6个阳性对照稀释液 不加 不加 各5.6μL 10×qRT-PCR酶混合液 2μL 2μL 2μL
需使用ROX染料I的机型：ABI Prism7000、7300、7700、7900HT、Step-One、Step-One Plus。
需使用ROX染料II的机型：ABI Prism 7500、7500Fast、MJ Research的Chromo4、Opticon(II)Corbett Rotor Gene3000。
不需要使用ROX的机型：Thermal Cycle Dice Real Time System，LightCycler、Smart Cycler System、Agilent Mx3000P、RotorGene3000、RotorGene 6000。 - 上机后按下面参数进行RT-PCR(参数可能会因仪器不同而需优化)。
过程 温度 时间 RT(逆转录) 50℃ 15～30分钟 预变性 95℃ 5分钟 RT-PCR反应
(40个循环)95℃ 15秒 60℃ 15秒(采集FAM通道的荧光信号)
四、数据处理
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35～40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。
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